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使用显色液时需要注意哪些要点？
更新时间：2022-03-25 点击次数：1405次
显色液SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体( 例如硝酸纤维素薄膜)后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的二抗体起反应，经过底物显色以检测电泳分离的特异性的蛋白。
显色液的使用要点：
1.请根据一抗来源选择试剂盒.
2 westem blotting DAB显色法操作简单，但其敏感性与ECL发光发有一定的差距，一般只适用于丰度较高的蛋白.
3.可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长较终漂洗次数与时间。如果条带过弱，同远长抗体孵育时间。
4.如果*没有条带，请检查前期蛋白处理及实验过程，如果确认无误， 反复两次依旧无结果，请换用ECL发光法显色。
5. TBST (0.01M)配制方法:称取NaCl8.5g，Tris 1.21g，用800ml的双蒸水溶解，用盐酸调PH到76,再
加入0SmlTween-20，用双蒸水加至1000ml,混匀即可。(也可按照自己的配制习惯来配制)
显色液的保存：
-20C避光密闭保存，- 年有效。若经常使用，可将封闭试剂，抗体稀释液和20倍DAB显色液B存放于2-8C以方便使用。
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